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RNA樣品的的抽提

更新時間:2018-10-12瀏覽:1934次

樣品RNA的抽提

①取凍存已裂解的細(xì)胞提供深度撮合服務,室溫放置5分鐘使其*溶解工藝技術。

②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯方重要的作用,蓋緊管蓋在此基礎上。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘狀況。4℃下12000rpm離心15分鐘機製性梗阻。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯相,中間層以及無色水相上層全過程。RNA全部被分配于水相中提供了遵循。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。

③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中大型。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA服務效率,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘重要意義。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊統籌發展。

④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)體系,清洗RNA沉淀生產製造。混勻后攜手共進,4℃下7000rpm離心5分鐘共同。

⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液推進一步,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時簡單化,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次力度,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用系統性。

 

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