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RNA樣品的的抽提

更新時(shí)間:2018-10-12瀏覽:2157次

樣品RNA的抽提

①取凍存已裂解的細(xì)胞進一步提升,室溫放置5分鐘使其*溶解方法。

②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯方,蓋緊管蓋開展試點。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后相結合,15到30℃孵育2到3分鐘高效化。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯相為產業發展,中間層以及無色水相上層範圍和領域。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%各項要求。

③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中更高要求。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后共謀發展,于4℃下12000rpm 離心10分鐘學習。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊結構重塑。

④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)應用優勢,清洗RNA沉淀高質量發展。混勻后高效節能,4℃下7000rpm離心5分鐘影響力範圍。

⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘新創新即將到來。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)邁出了重要的一步,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解設施,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用需求。

 

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