1. 前期準(zhǔn)備
- 實(shí)驗(yàn)材料:獲取神經(jīng)干細(xì)胞(如從胚胎腦組織分離)產業、微重力模擬裝置重要部署、神經(jīng)干細(xì)胞專用培養(yǎng)基(含 B27 添加劑深刻內涵、EGF臺上與臺下、bFGF 的 DMEM/F12 培養(yǎng)基)、多聚賴氨酸包被的培養(yǎng)容器創新延展、無(wú)菌器械等強化意識。
- 設(shè)備準(zhǔn)備:與腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)類似,調(diào)試賽奧維度CellSpace-3D微重力三維細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)進展情況,確保溫度的積極性、氣體環(huán)境適宜。
2. 細(xì)胞分離與接種
- 細(xì)胞分離:解剖獲取胚胎腦組織至關重要,在無(wú)菌條件下剪碎不久前,用胰蛋白酶消化后,通過(guò)機(jī)械吹打制成單細(xì)胞懸液提升行動,過(guò)濾去除組織塊能力建設,離心收集細(xì)胞。
- 接種:將神經(jīng)干細(xì)胞以 2 - 3×10? 個(gè)/mL 的密度接種到微重力培養(yǎng)裝置中研究進展,因神經(jīng)干細(xì)胞易貼壁無障礙,包被多聚賴氨酸可促進(jìn)貼壁。
3. 培養(yǎng)過(guò)程
- 每 2 - 3 天添加適量新鮮培養(yǎng)基快速融入,維持營(yíng)養(yǎng)成分認為。觀察細(xì)胞神經(jīng)球形成情況,神經(jīng)球直徑達(dá)到一定大小時(shí)增強,可進(jìn)行傳代培養(yǎng)重要意義。
- 采用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)志物(如 Nestin)的表達(dá),以鑒定細(xì)胞特性更加廣闊。
4. 誘導(dǎo)分化:培養(yǎng)一定時(shí)間后規劃,可更換為含血清的分化培養(yǎng)基,在微重力環(huán)境下誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元可以使用、星形膠質(zhì)細(xì)胞等分化進入當下,通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)相應(yīng)細(xì)胞標(biāo)志物(如 β - Tubulin III 用于神經(jīng)元堅實基礎,GFAP 用于星形膠質(zhì)細(xì)胞)評(píng)估分化效果。
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