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定量PCR儀的來(lái)歷及工作原理

更新時(shí)間:2015-07-14瀏覽:2586次

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)合作,簡(jiǎn)稱PCR。其英文Polymease Chain Reaction(PCR)是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法,由高溫變性高質量、低溫退火及適溫延伸等幾步反應(yīng)組成一個(gè)周期,循環(huán)進(jìn)行,使目的DNA得以迅速擴(kuò)增,具有特異性強(qiáng)大面積、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便橋梁作用、省時(shí)等特點(diǎn)長遠所需。它不僅可用于基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎(chǔ)研究,還可用于疾病病的診斷或任何有DNA,RNA的地方.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction讓人糾結,簡(jiǎn)稱PCR)又稱無(wú)細(xì)胞分子克隆或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴(kuò)增技術(shù)規模。 由美國(guó)科學(xué)家PE(Perkin Elmer珀金-埃爾默)公司遺傳部的Dr. Mullis發(fā)明,由于PCRPCR技術(shù)在理論和應(yīng)用上的跨時(shí)代意義基石之一,因此Mullis獲得了1993年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)聯動。

定量PCR儀工作原理

類似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物模樣。PCR由變性--退火--延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成:
①模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時(shí) 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)間后生產體系,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈很重要,以便它與引物結(jié)合技術節能,為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備;
②模板DNA與引物的退火(復(fù)性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后廣泛認同,溫度降至55℃左右國際要求,引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合;
③引物的延伸:DNA模板--引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下鍛造,以dNTP為反應(yīng)原料競爭激烈,靶序列為模板,按堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理改善,合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過(guò)程空白區,就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”,而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板信息化。每完成一個(gè)循環(huán)需2~4分鐘形勢,2~3小時(shí)就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬(wàn)倍。

 

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